梯度PCR儀設置梯度問題
發(fā)布時間：2013-12-03 閱讀：416次
梯度PCR在變性、延伸均可設置梯度，那么如果在摸條件時三步均設置梯度？
1.梯度PCR儀只是方便你尋找佳PCR退火溫度，可能減少你做PCR的次數(shù)和時間。使用時和樓上的兄弟說的一樣，但有一點需要說明一下，就是你所設的溫度梯度并不能象樓上的兄弟所說的那么簡單，設溫度梯度時，行的溫度是需要一個簡單計算的。
舉例說明：比如一個12X8的96孔板，如果一共可設12個溫度梯度，也就是說每8個孔是一個溫度。你所設的初始溫度是56度，你設的溫度梯度是14，那你每一排的溫度相差就是14/12。以些類推。
2.一個很實用且簡單的方法就是你將你所設計的引物我PCR產(chǎn)物放到Oligo中去評價，它會給你一個佳的退火溫度和循環(huán)參數(shù)，這個溫度實際上就和你通過梯度PCR摸索出來的退火溫度幾乎是一樣的。
3.以我的經(jīng)驗就直接用軟件給出的退火溫度就沒有問題。
